Al usar un analizador automático de bioquímica, nos encontramos a menudo con esta situación: una prueba realizada por separado da resultados correctos, pero al combinarse con otras pruebas los resultados se vuelven anómalos. La causa es que el sistema de lavado del analizador pierde eficacia con el tiempo de uso, aumentando el grado de contaminación cruzada entre reactivos.
La interferencia mutua entre reactivos afecta a la exactitud y fiabilidad de los resultados, introduce desviaciones importantes y a veces puede inducir a error al clínico y retrasar el diagnóstico.
Evitar la interferencia entre reactivos es por tanto muy importante y urgente en el trabajo diario de bioquímica clínica.
Causas frecuentes de la interferencia
El reactivo contiene el sustrato que se va a medir en la siguiente prueba, o alguno de sus componentes reacciona con el sustrato de la siguiente reacción, interfiriendo directamente en el resultado.
Otra causa es que la reacción desencadenada por el reactivo perturba indirectamente el curso de la prueba siguiente: cuando existe contaminación por reactivo, la medición siguiente refleja el resultado combinado de dos reacciones consecutivas.
Ejemplos típicos
① Cambio de pH: el arrastre entre amortiguadores de reacción altera el pH de la reacción siguiente, impidiendo que alcance condiciones óptimas.
Por ejemplo, en el método del biuret para la proteína total sérica, con las demás condiciones iguales, la reacción requiere condiciones alcalinas (pH 8–9) para que los enlaces peptídicos (—CONH—) reaccionen con la solución de cobre alcalino y formen el complejo violeta, midiendo así toda la proteína sérica.
Si el pH < 8, el resultado de proteína total es falsamente bajo, afectando directamente a la globulina y a la relación albúmina/globulina. Las enzimas reaccionan más rápido y con máxima sensibilidad en su pH óptimo, pero la capacidad amortiguadora es limitada y la contaminación por arrastre puede invalidar los resultados enzimáticos.
La mayoría de las reacciones enzimáticas trabajan a pH 6,0–7,5; ALP, γ-GT y LDH requieren condiciones alcalinas.
② Los reactivos de TG, T-CH, UA y Mg contienen sales biliares, que interfieren seriamente en la determinación de ácidos biliares por método enzimático cíclico.
③ Los reactivos de ALT (IFCC) y AST (IFCC) contienen LD de alta actividad y pueden interferir en la medición de LD.
④ Los reactivos de CK (NAC-activada) y CK-MB (NAC-activada) contienen Glu; su principio incluye la reacción de la hexoquinasa (HK) de la Glu, por lo que pueden interferir en la medición de Glu, especialmente grave con el método HK.
⑤ Los reactivos de Glu (HK), CK (NAC-activada), CK-MB (NAC-activada), TG, HDL-C y LDL-C (método directo) usan sales de magnesio, que pueden interferir en la medición posterior de Mg2+; la alta concentración de Cu2+ del reactivo TP también interfiere en la medición de Mg2+.
⑥ Los reactivos de ALT, AST, LDH, CK, CK-MB, UA, γ-GT y TP contienen K+, con curso igual o contrario al de la medición enzimática de K+, interfiriendo en sus resultados.
⑦ Los reactivos de ChE (butiltiocolina), TC (ChOD-PAP), Glu (GOD-PAP), UA (uricasa) y α-HBDH (DGKC) usan amortiguadores de fosfato, que pueden interferir en la medición de fósforo inorgánico.
⑧ El reactivo de Mg2+ (Calmagita) contiene EGTA, un quelante de Ca2+, que puede interferir en la medición de Ca2+.
⑨ La CK no debe medirse antes de ALP o Ca, porque el EDTA-Na de la solución de reacción de CK inhibe la actividad de ALP y une el Ca, reduciendo los resultados.
⑩ La medición enzimática de BUN consume NADH mediante la glutamato deshidrogenasa (GLDH), por lo que no debe colocarse inmediatamente antes de pruebas cuyo sustrato sea NADH, como ALT y AST.
Pruebas de detección
En realidad, las instrucciones de los fabricantes no siempre reflejan plenamente la composición de los reactivos, y los factores que influyen en las reacciones bioquímicas son muy complejos.
Por eso resulta aún más importante descubrir mediante experimentos la posible interferencia por contaminación cruzada.
Se pueden realizar las siguientes pruebas para detectar posibles interferencias entre reactivos:
Contramedidas
A partir del análisis de las causas y de las pruebas de detección anteriores, pueden adoptarse medidas específicas para eliminar la interferencia. Los métodos habituales son:
El personal debe conocer a fondo el estado del analizador y considerar la posibilidad de contaminación cruzada al elegir las pruebas de una muestra o el paso de la última prueba de una muestra a la primera de la siguiente, ordenando las pruebas de forma razonable para obtener resultados más fiables.
Las pruebas bioquímicas habituales pueden ordenarse así:
P, Alb, DBIL, TBIL, K, Ca, CK, TBA, TG, AFU, ALT, CK-MB, APOA1, T-CH, APOB, Cl, HDL-C, LP(a), AST, GPDA, AMY, LDL-C, BUN, UA, CHE, ADA, γ-GT, Mg, Na, ALP, LDH, GPDA, TP, Cr.
Cierre
Con estos métodos puede resolverse la mayor parte de la contaminación cruzada. En la práctica, cuando el analizador realiza múltiples pruebas de forma continua, el detalle de cada reacción es difícil de observar.
Debemos conocer a fondo el principio de funcionamiento, los métodos, el flujo de trabajo y el estado del analizador, analizar en profundidad la composición de los reactivos y su principio de reacción, y combinar teoría y práctica para desarrollar procedimientos adaptados a nuestro laboratorio.
Este artículo procede de "MiaoBi Biochemistry" y se reproduce solo con fines de intercambio y aprendizaje. Si existe cualquier problema de derechos, contáctenos y lo atenderemos de inmediato.