Lors de l'utilisation d'un analyseur automatique de biochimie, nous rencontrons souvent la situation suivante : une analyse réalisée seule donne des résultats corrects, mais combinée à certaines autres analyses, les résultats deviennent anormaux. La raison en est que le système de lavage de l'analyseur perd progressivement en efficacité avec le temps d'utilisation, augmentant la contamination croisée entre réactifs.

L'interférence mutuelle entre réactifs compromet l'exactitude et la fiabilité des résultats, introduit des écarts importants et peut parfois induire le clinicien en erreur et retarder le diagnostic.

Éviter les interférences entre réactifs est donc très important et urgent dans le travail quotidien de biochimie clinique.

Causes fréquentes d’interférence

Le réactif contient le substrat à doser dans le test suivant, ou l'un de ses composants réagit avec le substrat de la réaction suivante, interférant directement avec le résultat.

Une autre cause est que la réaction déclenchée par le réactif perturbe indirectement le déroulement du test suivant : en présence d'une contamination par réactif, la mesure suivante reflète le résultat combiné de deux réactions consécutives.

Exemples typiques

① Modification du pH : le report entre tampons de réaction modifie le pH de la réaction suivante, l’empêchant d’atteindre des conditions optimales.

Par exemple, dans la méthode du biuret pour le dosage des protéines totales sériques, à conditions égales, la réaction exige des conditions alcalines (pH 8–9) pour que les liaisons peptidiques (—CONH—) réagissent avec la solution de cuivre alcalin et forment le complexe violet, dosant ainsi la totalité des protéines sériques.

Si le pH < 8, le résultat des protéines totales est faussement bas, affectant directement la globuline et le rapport albumine/globuline. Les enzymes réagissent plus vite et avec une sensibilité maximale à leur pH optimal, mais la capacité tampon étant limitée, la contamination par report peut invalider les résultats enzymatiques.

La plupart des réactions enzymatiques se déroulent à pH 6,0–7,5 ; ALP, γ-GT et LDH exigent des conditions alcalines.

② Les réactifs TG, T-CH, UA et Mg contiennent des sels biliaires, qui perturbent gravement le dosage des acides biliaires par méthode enzymatique cyclique.

③ Les réactifs ALT (IFCC) et AST (IFCC) contiennent des LD de forte activité et peuvent interférer avec le dosage des LD.

④ Les réactifs CK (NAC-activée) et CK-MB (NAC-activée) contiennent du Glu ; leur principe inclut la réaction de l'hexokinase (HK) du Glu, pouvant interférer avec le dosage du Glu — surtout grave par la méthode HK.

⑤ Les réactifs Glu (HK), CK (NAC-activée), CK-MB (NAC-activée), TG, HDL-C et LDL-C (méthode directe) utilisent des sels de magnésium, susceptibles d'interférer avec la mesure ultérieure du Mg2+ ; la forte concentration de Cu2+ du réactif TP interfère également avec la mesure du Mg2+.

⑥ Les réactifs ALT, AST, LDH, CK, CK-MB, UA, γ-GT et TP contiennent du K+, dont le déroulement est identique ou opposé à celui du dosage enzymatique du K+, interférant avec ses résultats.

⑦ Les réactifs ChE (butyrylthiocholine), TC (ChOD-PAP), Glu (GOD-PAP), UA (uricase) et α-HBDH (DGKC) utilisent des tampons phosphate, susceptibles d'interférer avec le dosage du phosphore inorganique.

⑧ Le réactif Mg2+ (Calmagite) contient de l'EGTA, chélateur du Ca2+, pouvant interférer avec le dosage du Ca2+.

⑨ Le dosage de la CK ne doit pas précéder ceux de la ALP ou du Ca, car l'EDTA-Na de la solution de réaction CK inhibe l'activité ALP et lie le Ca, abaissant les résultats.

⑩ Le dosage enzymatique de l'urée (BUN) consomme du NADH via la glutamate déshydrogénase (GLDH) ; il ne doit donc pas être placé immédiatement avant des tests dont le substrat est le NADH, comme ALT et AST.

Tests de dépistage

En réalité, les notices des fabricants ne reflètent souvent pas pleinement la composition des réactifs, et les facteurs influençant les réactions biochimiques sont très complexes.

Découvrir expérimentalement les interférences possibles dues à la contamination croisée est donc d'autant plus important.

Les tests suivants permettent de dépister et d'identifier les interférences possibles entre réactifs :

Contre-mesures

À partir des causes et des tests de dépistage ci-dessus, des mesures ciblées peuvent être prises pour éliminer les interférences. Les méthodes courantes sont :

Les opérateurs doivent connaître parfaitement l'état de l'analyseur et prendre en compte la possibilité de contamination croisée lors du choix des analyses d'un échantillon ou du passage de la dernière analyse d'un échantillon à la première du suivant, afin d'obtenir des résultats plus fiables.

Les analyses biochimiques courantes peuvent être ordonnées comme suit :

P, Alb, DBIL, TBIL, K, Ca, CK, TBA, TG, AFU, ALT, CK-MB, APOA1, T-CH, APOB, Cl, HDL-C, LP(a), AST, GPDA, AMY, LDL-C, BUN, UA, CHE, ADA, γ-GT, Mg, Na, ALP, LDH, GPDA, TP, Cr.

Conclusion

Grâce à ces méthodes, l'essentiel de la contamination croisée peut être résolu. En pratique, lorsque l'analyseur enchaîne de nombreuses analyses, le détail de chaque réaction est difficile à observer.

Nous devons connaître parfaitement le principe de fonctionnement, les méthodes, le déroulement et l'état de l'analyseur, analyser en profondeur la composition des réactifs et leurs principes réactionnels, et combiner théorie et pratique pour élaborer des procédures adaptées à notre laboratoire.

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