Ao usar um analisador automático de bioquímica, deparamo-nos frequentemente com esta situação: uma prova realizada isoladamente dá resultados corretos, mas ao combiná-la com certas outras provas os resultados tornam-se anômalos. A razão é que o sistema de lavagem do analisador perde eficácia à medida que o tempo de uso se acumula, aumentando o grau de contaminação cruzada entre reagentes.

A interferência mútua entre reagentes afeta a exatidão e a fiabilidade dos resultados, introduz desvios importantes e por vezes pode induzir o clínico em erro e atrasar o diagnóstico.

Evitar a interferência entre reagentes é, por isso, muito importante e urgente no trabalho diário de bioquímica clínica.

Causas frequentes da interferência

O reagente contém o substrato a medir na prova seguinte, ou algum dos seus componentes reage com o substrato da reação seguinte, interferindo diretamente no resultado.

Outra causa é que a reação desencadeada pelo reagente perturba indiretamente o curso da prova seguinte: quando há contaminação por reagente, a medição seguinte reflete o resultado combinado de duas reações consecutivas.

Exemplos típicos

① Alteração do pH: o arraste entre tampões de reação altera o pH da reação seguinte, impedindo-a de atingir condições ótimas.

Por exemplo, no método do biureto para a proteína total sérica, com as demais condições iguais, a reação exige condições alcalinas (pH 8–9) para que as ligações peptídicas (—CONH—) reajam com a solução de cobre alcalino e formem o complexo violeta, medindo assim toda a proteína sérica.

Se o pH < 8, o resultado da proteína total é falsamente baixo, afetando diretamente a globulina e a relação albumina/globulina. As enzimas reagem mais depressa e com sensibilidade máxima no pH ótimo, mas como a capacidade tampão é limitada, a contaminação por arraste pode invalidar os resultados enzimáticos.

A maioria das reações enzimáticas trabalha a pH 6,0–7,5; ALP, γ-GT e LDH exigem condições alcalinas.

② Os reagentes de TG, T-CH, UA e Mg contêm sais biliares, que interferem gravemente na determinação de ácidos biliares por método enzimático cíclico.

③ Os reagentes de ALT (IFCC) e AST (IFCC) contêm LD de alta atividade e podem interferir na medição de LD.

④ Os reagentes de CK (NAC-ativada) e CK-MB (NAC-ativada) contêm Glu; o seu princípio inclui a reação da hexoquinase (HK) da Glu, podendo interferir na medição de Glu — especialmente grave pelo método HK.

⑤ Os reagentes de Glu (HK), CK (NAC-ativada), CK-MB (NAC-ativada), TG, HDL-C e LDL-C (método direto) usam sais de magnésio, que podem interferir na medição posterior de Mg2+; a alta concentração de Cu2+ do reagente TP também interfere na medição de Mg2+.

⑥ Os reagentes de ALT, AST, LDH, CK, CK-MB, UA, γ-GT e TP contêm K+, com curso igual ou contrário ao da medição enzimática de K+, interferindo nos seus resultados.

⑦ Os reagentes de ChE (butiltiocolina), TC (ChOD-PAP), Glu (GOD-PAP), UA (uricase) e α-HBDH (DGKC) usam tampões de fosfato, que podem interferir na medição de fósforo inorgânico.

⑧ O reagente de Mg2+ (Calmagita) contém EGTA, um quelante de Ca2+, podendo interferir na medição de Ca2+.

⑨ A CK não deve ser medida antes de ALP ou Ca, porque o EDTA-Na da solução de reação da CK inibe a atividade da ALP e liga o Ca, baixando os resultados.

⑩ A medição enzimática de BUN consome NADH via glutamato desidrogenase (GLDH), pelo que não deve ser colocada imediatamente antes de provas cujo substrato é NADH, como ALT e AST.

Testes de despiste

Na verdade, os insertos dos fabricantes nem sempre refletem plenamente a composição dos reagentes, e os fatores que influenciam as reações bioquímicas são muito complexos.

Por isso, descobrir por experimentos a possível interferência da contaminação cruzada é ainda mais importante.

Podem realizar-se os seguintes testes para detetar possíveis interferências entre reagentes:

Contramedidas

Com base nas causas e nos testes de despiste acima, podem tomar-se medidas específicas para eliminar a interferência. Os métodos habituais são:

Os operadores devem conhecer a fundo o estado do analisador e considerar a possibilidade de contaminação cruzada ao escolher as provas de uma amostra ou a passagem da última prova de uma amostra para a primeira da seguinte, ordenando as provas de forma razoável para obter resultados mais fiáveis.

As provas bioquímicas habituais podem ordenar-se assim:

P, Alb, DBIL, TBIL, K, Ca, CK, TBA, TG, AFU, ALT, CK-MB, APOA1, T-CH, APOB, Cl, HDL-C, LP(a), AST, GPDA, AMY, LDL-C, BUN, UA, CHE, ADA, γ-GT, Mg, Na, ALP, LDH, GPDA, TP, Cr.

Encerramento

Com estes métodos, a maior parte da contaminação cruzada pode ser resolvida. Na prática, quando o analisador realiza muitas provas continuamente, o detalhe de cada reação é difícil de observar.

Temos de conhecer a fundo o princípio de funcionamento, os métodos, o fluxo de trabalho e o estado do analisador, analisar em profundidade a composição dos reagentes e os seus princípios de reação, combinando teoria e prática para desenvolver procedimentos adaptados ao nosso laboratório.

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